Головна
Реферати » Реферати з біології » Методи дослідження в цитології

Методи дослідження в цитології

культурі, хоч і належать до одного й того ж типу, в будь-який даний момент часу перебуватимуть на різних стадіях клітинного циклу, якщо не вжити спеціальних заходів для синхронізації їх циклів. Проте, шляхом введення в клітини тритій-тимідину і подальшого виготовлення радиоавтографов можна визначити тривалість різних стадій циклу. Час настання однієї стадії - мітозу - можна визначити і без міченого тимідину. Для цього вибірку клітин з культури тримають під наглядом в фазово-контрастному мікроскопі, який дає можливість безпосередньо стежити за перебігом мітозу і встановлювати його терміни. Тривалість мітозу зазвичай дорівнює 1 год, хоча в клітинах деяких типів він займає до 1.5 ч.

Визначення тривалості G 2-періоду.

Для визначення тривалості G 2-періоду застосовують метод, відомий під назвою імпульсної мітки: до культури клітин додають мічений тимідин, а через короткий час замінюють культуральну середу свіжої, з тим, щоб запобігти подальше поглинання клітинами міченого тимідину. При цьому мітку включають тільки в ті клітини, які протягом короткочасного перебування в середовищі з тритій-тимідину знаходилися в S-періоді клітинного циклу. Частка таких клітин невелика і лише невелика частина клітин отримає мітку. Крім того, всі клітини, що включають мітку, будуть перебувати в інтерфазі - від клітин, ледь вступили в S-період, до таких, які майже закінчили його за час впливу тритій-тимідину. У пробі, взятій відразу після видалення міченого тимідину, мітка міститься тільки в інтерфазних ядрах, що належать клітинам, які в період впливу мітки перебувають у S-періоді; ті ж клітини, які в цей період перебували в стані мітозу, залишаються немічених.

Якщо потім продовжувати відбирати з культури проби через певні проміжки часу і виготовляти для кожної послідовної проби радіоавтограф, то настане момент, коли мітка почне з'являтися в мітотичних d-хромосомах. Мітки включатимуться в усі ті клітини, які в період наявності в середовищі тритій-тимідину знаходилися в S-періоді, причому серед цих клітин будуть як тільки що вступили в S-період, так і майже закінчили його. Цілком очевидно, що ці останні першими серед мічених клітин пророблять митоз і, отже, в їх митотических хромосомах виявиться мітка. Тим самим проміжок між 1) часом, коли з культури був видалений мічений тимідин, і 2) часом появи мічених митотических хромосом відповідатиме тривалості G 2-періоду клітинного циклу.

Визначення тривалості S-періоду.

Оскільки клітини, що знаходяться в момент введення в середу мітки в самому кінці S-періоду, першими вступлять в мітоз, то, отже, в тих клітинах, у яких S-період починається безпосередньо перед видаленням мітки, мічені митотические хромосоми з'являться в останню чергу. Тому, якби нам вдалося визначити проміжок між часом вступу в мітоз клітин, помічених першими, і клітин, помічених останніми, ми встановили б тривалість S-періоду. Однак, хоча час, коли вперше з'являються мічені митотические хромосоми, встановити легко, час вступу в мітоз клітин, помічених останніми, визначити неможливо
(цьому перешкоджає дуже велика кількість мічених клітин, які діляться в останніх пробах). Тому тривалість S-періоду доводиться визначати іншим способом.

При дослідженні радиоавтографов послідовних проб клітин, що відбираються через однакові проміжки часу, виявляється, що частка клітин, які мають мітку в своїх митотических хромосомах, поступово зростає, поки міченими не опиняться буквально все діляться клітини.
Однак, у міру того як клітини одна за одною завершують мітоз, вони перетворюються в мічені інтерфазних клітини. Першими завершують мітоз ті з мічених клітин, які вступили в нього першими; і відповідно з клітин з міченими мітотичними хромосомами останніми завершують мітоз ті, які вступили в нього пізніше за всіх. Оскільки тривалість мітозу завжди однакова, то, отже, якби ми могли визначити проміжок між:
1) часом закінчення мітозу в клітинах, які включили мітку першими, і 2) часом закінчення мітозу в клітинах, які включили мітку останніми, ми встановили б тривалість S-періоду. Тривалість S-періоду неважко встановити, визначивши проміжок між: 1) моментом часу, коли
50% мітотичних клітин у культурі несуть мітку, і 2) моментом часу, після якого культура вже не містить 50% мічених клітин.

Визначення часу генерації (загальної тривалості всього клітинного циклу).

Продовжуючи відбирати з культури проби клітин, можна виявити, що мічені постаті мітозу в якийсь момент абсолютно зникають, а потім з'являються знову. Такі діляться клітини є дочірні клітини, що походять від тих материнських клітин, які включили мітку, перебуваючи в момент впливу тритій-тимідину в S-періоді. Ці материнські клітини перейшли в S-період, розділилися, а потім пройшли через другу інтерфазу і друге розподіл, тобто виконали один повний цикл і частина наступного. Час, необхідний для проходження повного клітинного циклу, називається часом генерації. Воно відповідає проміжку між двома послідовними піками включення мітки і зазвичай відповідає відрізку між тими точками послідовних висхідних кривих, в яких 50% фігур мітозу містять мітку.
Література.
А.Хем, Д.Кормак «Гістологія» , том 1 Москва «МИР» 1982;
М.Г.Абрамов «Клінічна цитологія» Москва «МЕДИЦИНА» 1974;
Ю.С.Ченцов «Загальна цитологія»


Сторінки: 1 2
 
Подібні реферати:
Поділ клітини. Мітоз
Здатність до поділу - найважливіша властивість кліток. Без розподілу неможливо уявити собі збільшення числа одноклітинних істот, розвиток складного багатоклітинного організму з однієї заплідненої яйцеклітини
Порівняльна таблиця мітозу і мейозу
| Мітоз | Мейоз | | Мітоз (від грец. mнtos - нитка), каріокінез, непряме | Мейоз (від грец. mйiosis - зменшення), редукционное | | розподіл клітини, найбільш поширений спосіб | поділ, поділу дозрівання
Тести з біології для шкіл ( на жаль без відповідей)
1. Органи, об'єднані спільною роботою, складають систему органів. 2. Серце, нирки, легені - це внутрішні органи. 3. Видільна система забезпечує газообмін в організмі. 4. Опорно-двигун
Природознавство
Морфологія хромосом. Спадкова інф знаходитися в нитках ДНК. Хромосоми форм з хромотіна тобто комплексу ДНК і білка. Між поділами це тонкі сильно витягнуті місцями потовщені поодинокі нитки. Ці нитки обр
Розмноження організмів
При всій різноманітності живих організмів, що населяють планету, при всіх відмінностях в будові і способі життя, способи їх розмноження в природі зводяться до двох форм : безстатевої і статевий. Деякі рослини поєднують ці дві форми.
Полиплоидия та отримання полиплоидов
У 1892 році російський ботанік І.І. Герасимов досліджував вплив температури на клітини зеленої водорості спірогира і виявив дивовижне явище - зміна числа ядер в клітині. Після впливу низькою темпер
Клітинне ядро ??
Ядро оточене оболонкою, яка складається з двох мембран, які мають типову будову. Зовнішня ядерна мембрана з поверхні, зверненої в цитоплазму, покрита рибосомами, внутрішня мембрана гладка.
Метод ідентифікації собак по їх ДНК
Ідентифікація організму (метод мікросателітів) спочатку була розроблена для людей, але ця ж сама методика може бути з успіхом використана і для собак.
Цитологія
Цитологія-наука про клітину. Предмет цитології-клітини багатоклітинних тварин і рослин, а також одноклітинних організмів, до числа яких відносяться бактерії, найпростіші і одноклітинні водорості. Цитологія з
Екзаменаційні квитки
1. Клітина - структурна і функціональна одиниця організмів всіх царств живої природи. 2. Палеонтологічні, порівняльно - анатомічні, ембріологічні докази еволюції органічного світу. 3
Дослідження клітинного циклу методом проточної цитометрії
Справжній огляд літератури присвячений застосуванню цитометрії для оцінки параметрів клітинного циклу на експериментальному і клінічному матеріалі. Хоча в огляді переважно наводяться відомості, що стосуються проточною
Квитки по загальній біології за весняний семестр 2001 года
Ліннея, Ж. Б. Ламарка, Т. Мальтуса, Е . Геккеля. 3. Історія створення теорії еволюції Ч. Дарвіна. 4. Теорія еволюції Ч. Дарвіна і А. Уоллеса. 5. Неодарвінізм. 6. Спостереження і висновки, на яких про
Основи цитології
цитологія (від цито ... і ... логія), наука про клітину. Ц. вивчає клітини багатоклітинних тварин, рослин, ядерно-цітоплазматіч. комплекси, які не розчленовані на клітини (симпласти, сінцітіі і плазмодії), одноклітинні
Будова і функції клітини
Цитологія (грец. «цитос» - клітина, «логос» - наука) - наука про клітини. Цитологія вивчає будову і хімічний склад клітин, функції клітин в організмі тварин і рослин, розмноження та розвиток клітин, прис
квіткові рослини
Екстракорпоральне запліднення і трансплантація ембріона - запліднення яіцеклеткі поза організмом і пересадка дробящихся ембріонів в порожнину матки.
Розвиток зародка людини
На що схожа дитина на самому початку свого життя - в животі матері? Це яйце, іншими словами - клітина. Вона складається, як і всі клітини людського тіла, з крапельки речовини - протоплазми з ядром посередині.
Статевий цикл собак і кішок
Статевий цикл - складний нейрогуморальної рефлекторний процес, що супроводжується комплексом фізіологічних і морфологічних змін, що відбуваються в статевому апараті і у всьому організмі самки від однієї овуляції до іншої.
Отримання моноклональних антитіл
Для багатьох досліджень, пов'язаних з вивченням біологічних структур велику цінність представляють реагенти, здатних специфічно взаємодіяти з даною структурою. Універсальним реагентом, що володіє у
Старіння на клітинному рівні
Коли відомий вчений А. Вейсман сформулював свою теорію про те, що смерть предків може бути способом розчистити шлях більш досконалим нащадкам , він керувався тільки міркуваннями біологічної цільових перевірок
Все про клітці
З 110 елементів Періодичної системи Менделєєва до складу організмів входить більше половини, причому 24 з них є обов'язковими і виявляються майже у всіх типах клітин. За процентним вмістом в кле