Головна
Реферати » Реферати з биологии » Отримання моноклональних Антитіл

Отримання моноклональних Антитіл

факторами в даним методі були низька концентрація кисни в атмосфері (7%), висока щільність клітін, легке погойдування культури, щоденне додавання свіжої середовища и вибір підходящої партії СПК та антигену (вікорістовувалі еритроцити барана).
Інший основною системою імунізації in vitro є метод Д. Марбрука.
Клітини культівують в маленькій камері на діалізної мембрані, через якові Йде обмін СЕРЕДОВИЩА з великого резервуара.
Одним з основних недоліків імунізації in vitro є Частка IgM-утворюючіх клонів. Це пов'язано з тим, что при імунізації in vivo Клітини беруть во время вторінної імунної ВІДПОВІДІ, при якому утворюються в основному антитіла IgG класу, тоді як in vitro Реакція Йде по Первін типу, для Якого характерна продукція IgM Антитіл. Ця проблема может буті подолано после відпрацювання способів Отримання вторінної імунної ВІДПОВІДІ in vitro.

Злиттів

Існують два основні Варіанти додавання ПЕГ, что Використовують в Данії годину. Перший методу Полягає в Наступний. ПРОТЯГ 1 хв додаються 1 мл 50% розчин ПЕГ при 370 С з постійнім перемішуванням. Потім розчин поступово розбавляють до 10 мл ПРОТЯГ декількох хвилин СЕРЕДОВИЩА без Сироватко, после чего Клітини центрифугують и ресуспендіруют в середовіщі культівування.
У іншому методі Використовують більш трівалу Обробка клітін Розчин
ПЕГ. До облогу клітін додається 30-35% ПЕГ при кімнатній температурі.
Клітини центрифугують 2 хв, потім їх залішають при кімнатній температурі ще на 5-7 хв. Потім їх розводять у великому обсязі середовища з Сироватко, обмівають и культівують.

Клонування гібрідомніх клітін

Клонування здійснюється для віділення стабільніх клонів гібрідомніх клітін. Для недавно Утворення гібрідомніх клітін характерна висока нестабільність, пов'язана з ВТРАТИ хромосом. При культівуванні могут з'являтися Клітини, що втратив здатність продукуваті антитіла и смороду могут переростаті антітелообразующіе гібрідні Клітини.
До основних методів Клонування клітін відносяться Клонування методом лімітуючіх розведения, Клонування в напіврідкому агарі и Клонування помощью приладнали - проточного цитофлуориметр.
Клонування методом лімітують розведения. Если Клітини посіяні в 96 - Ямковий планшет Дуже Рідко, то Частка лунок, в якій спостерігається ріст клітін, підпорядковується розподілу Пуассона:
де f (0) - Фракція лунок, в якіх відсутній ріст; (-Середнє число клітін на лунку.
При (= 1 f (0) = 0,37. Для того, щоб отріматі розумну ймовірність Тільки одного клону в лунці, у більш 37% лунок не винних спостерігатіся зростанню клітін. Оскількі Ефективність Клонування Рідко Буває рівною 100%, Клітини звітність, засіваті при щільності 10, 3 и 0,5 клітін на лунку. У тихий планшетах, на якіх спостерігається ЗРОСТАННЯ в половіні лунок, містяться ізольовані клони.
При первом клонуванні активною может віявітіся Тільки невелика частина клонів. звітність, всегда вчинити повторне Клонування, при якому Частка позитивних клонів буде зростаті.
Для Клонування треба застосовуваті Клітини жівільного кулі. Використовують ті ж види клітін, что и для початкових зростанню гібрідом.
Клонування в напіврідкому агар-агарі. Для Клонування гібрідом можна застосовуваті напіврідкій агар. Зазвічай береться система, что Складається з двох шарів.
Нижній (твердий) куля містіть 0,5% агар-агару в середовіщі культівування. Йому дають затвердіті. Потім додаються другий шар - м'який, что містіть 0,3% агар-агару, до Якого включаються клонують Клітини. При вікорістанні клітін жівільного кулі їх засівають в чашку Петрі до заливки агар-агару, и середу культівування відаляють безпосередно перед додаванням Нижнього кулі агару.
Колонії стають видимими через 7-14 діб, їх переносячи на рідку культуру.
Клонування помощью проточного цитофлуориметр. Готують флуоресцентні мікрошарікі з латексу и покрівають їх антигеном. Такі кульки адсорбуються на антигенспецифических гібрідомніх клітінах, что дозволяє віділяті їх на цьом пріладі.
После віділення тім чи іншім способом позитивних клонів, Клітини ціх клонів розмножуються в достатній кількості и зразки їх заморожуються.

Масова напрацювання моноклональних Антитіл

После відбору гібрідомної клітін, Які сінтезують цікавлять дослідника антитіла, можна приступити до їх масового нарощування з метою Отримання великих кількостей моноклональних Антитіл. На качану культівування гібрідомної Клітини могут рости Повільно и погано переносіті НИЗЬКИХ щільність посіву. У зв'язку з ЦІМ при пересеве клітін їх треба розводіті НЕ больше чем в
3-5 разів. Прискорення росту клітін может Сприяти додавання клітін жівільного кулі. Гібрідомної Клітини звітність, підтрімуваті в логаріфмічній фазі росту и унікат Підвищення концентрації клітін Вище
0,5 млн / мл. Клітини можна культівуваті як у стаціонарній культурі, так и в ролерною, а такоже у різного роду культиваторах (ферментерах).
Для Отримання максімальної ПРОДУКЦІЇ моноклональних Антитіл клітінам дозволяють рости до граничної щільності. У такій культурі через Певний годину спостерігається Загибель гібрідомніх клітін. Надосадова Рідина збірається, а клітінній облог відкідається, тоб НЕ намагають культівуваті далі залиша живі Клітини.
Для Отримання великих кількостей Антитіл вводять гібрідомної живі Клітини в організм Тварини і отримуються від них асцітної рідіну. Попередньо тваринам вводять агенти, что підвіщують здатність гібрідом рости в черевній порожніні. У якості такого агента найчастіше Виступає пристав - 0,5 мл за
10-14 діб до введення клітін.

Очищення Антитіл

Для багатьох цілей НЕ нужно Очищення Антитіл, и смороду Використовують у вігляді культурально рідін або асцітної рідін. Грубу іммуноглобуліновіе фракцію можна отріматі вісолюванням білків сульфатом амонію з Наступний діалізом. Если антитіла звітність, віділіті в чистому вігляді, то Попередньо візначають їх клас и підклас, так як способи очищення розрізняються для Антитіл різніх класів. Це можна сделать с помощью методу иммунодиффузии по Ухтерлоні.
Віділення чистих Антитіл Найкраще Проводити на імуносорбент. При цьом методі, прот, є Небезпека, что при фіксації змінюється антигенну структуру клітінної поверхні.
Якщо не вдається віділіті антитіла прямим способом, то отримуються іммуноглобуліновіе фракцію помощью різніх методів афінної та іонообмінної хроматографії на сефарозес пришитими ковалентно білком А.

Висновок

Одне Із Завдання клітінної інженерії Полягає в створенні клітінніх систем з новімі властівостямі на Основі клітінніх взаємодій. У Данії годину удосконалюються методи імунізації поза організмом и вівчаються механізмі актівації В-лімфоцитів. Це особливо ВАЖЛИВО для Отримання моноклональних Антитіл людини.
Однією з умов подалі Успіхів на шляху Отримання клітін и клітінніх систем з новімі властівостямі є поглиблення знань, что стосують фундаментальних основ биологии: механізмів регуляції процеса клітінної діференціації, фізіології протопластів як об'єкта біологічної трансформації клітін, взаємін клітінніх органел. Отже, прогрес у розвітку клітінної інженерії буде в значній мірі візначатіся успіхамі в Галузі клітінної биологии та клітінної фізіології.


Сторінки: 1 2
 
Подібні реферати:
Сорбційні Властивості Моху по відношенню до мікроорганізмів и Важка металах
У Скляні флакони поміщають навішування по 200 +0,5 мг Моху, Зважені на аналітичних Вагах. Додаються по 50 мл Розчин металу 0,02 моль / л и ретельно перемішують. Через 5, 10, 20, 30, 60 и 120 хв мох отфіл
Рекомбінантні вакцини (Генна інженерія)
Існуючі традіційні вакцини, незважаючі на очевидні позитивні ефект їх широкого ! застосування, володіють рядом недоліків. До них відносяться: наявність небажаним біологічно активних и баластних компо
Клонування
прото, особливий Інтерес віклікають досліді групи вчених з УНІВЕРСИТЕТУ в Гонолулу на чолі з Ріузо Янагімачі. Авторам удалось удосконаліті метод Уилмута, про Який мова піде нижчих, смороду відмовіліся від їв
Біотехнологія
- це Використання живих організмів и біологічніх процесів у ВИРОБНИЦТВІ, тоб виробництво необхідніх для людини Речовини з використаних досягнені мікробіології, біохімії І ТЕХНОЛОГІЇ.
Клонування
Термін "клон" походити від грецького слова "klon", Що означає - гілочка, втеча, держак, и має відношення, дере за все до вегетативного розмноження . Клонування рослин живцями, Нирко чі бульби
Квіткові рослини
екстракорпоральних запліднення и трансплантація ембріона - запліднення яіцеклеткі поза організмом и пересадка дробящихся ембріонів в порожніну матки.
Історія та методологія Клонування
Доллі - віпадковість чі закономірність?. Перші досліді на амфібія. Невдачі експеріментів з мішамі. Кролики, корови и свині.
Генна інженерія
Генна інженерія - це метод БІОТЕХНОЛОГІЇ, Який займається дослідженнямі з перебудови генотіпів. Генотип є не просто механічна сума генів, а складна, что склалось в процесі еволюції Головна організмів
Порівняльна таблиця мітозу и мейозу
| Мітоз | Мейоз | | Мітоз (від греч . mнtos - нитка), каріокінез, непряма | Мейоз (від грец. mйiosis - Зменшення), редукционное | | Розподіл Клітини, найбільш Поширення способ | поділ, поділу дозрівання
БІОТЕХНОЛОГІЇ
БІОТЕХНОЛОГІЯ, Використання живих організмів и біологічніх процесів у промисловому ВИРОБНИЦТВІ. Розвівається Мікробіологічний синтез ферментів, вітамінів, амінокіслот, антібіотіків и т. п. Перспективно пр
Клонування
Річард Сід Термін "клон" походити від грецького слова "klon", Що означає - гілочка, втеча, держак, и має відношення Перш за все до вегетативного розмноження. Клонування рослин живцями, нирка
Методи Дослідження в цітології
Кожна клітина Складається з ядра и цитоплазми, відокремленіх один від одного и от зовнішнього середовища оболонками. Компонентами цитоплазми є: оболонка, гіалоплазма, ендоплазматична мережа и рибосоми, апарат Гольджі,
Що Спільного у ІМУНІТЕТ рослин и тварин
Відмінності в розумінні стійкості до інфекційніх хвороб у рослин и тварин. Імуномодуляторі патогенних мікроорганізмів. Імунні молекули. Передача сигналу и імунну відповідь.
Основи цітології
Цитологія (від цито ... і ... логія), наука про клітіну. Ц. вівчає Клітини багатоклітінніх тварин, рослин, ядерно-цітоплазматіч. комплекси, Які НЕ розчленовані на Клітини (симпласти, сінцітіі и плазмодії), одноклітінні
Клітінна інженерія
До складу плазматічної мембрану входять Білки и ліпіді. Смороду упорядковане розташовані и з'єднані один з одним хімічними взаємодіямі. За сучасности уявленнямі молекули ліпідів у плазматічній мембр
Клітінна інженерія
Цитологія - наука про клітіну. Наука про клітці назівається цітологією (грец. «цитос" - клітина, «логос" - наука). Предмет цітології - Клітини багатоклітінніх Тварини і рослини ний, а такоже одноклітінніх організмів, до числа якіх відносяться бактерії.
Функціональна актівність лейкоцітів КРОВІ щурів, Які зізналася впліву н ...
При Дії на організм екстремальних факторів, до числа якіх захи переохолодження, відбуваються Зміни гомеостатичності констант (самперед відносяться до системи КРОВІ).
Біологічна роль, структура и віділення мітохондрій з печінкі щурів.
Келлікер одним з дерло описані характерні чином орієнтовані гранульова в саркоплазме поперечно-смугастої м'язи. Йому захи так само честь Першого віділення мітохондрій з клітінніх структур. У 1888
Генна інженерія
Генна інженерія вінікає в70-ті рр. .. як нова галузь молекулярної биологии, головне Завдання Якої - активна и цілеспрямована перебудова генрв живих істот, їх конструювання, тоб управління спадковістю.
Цитологія
Цитологія-наука про клітіну. Предмет цітології-Клітини багатоклітінніх Тварини і рослин, а такоже одноклітінніх організмів, до числа якіх відносяться бактерії, найпростіші и одноклітінні водорості. Цитологія з