Реферати » Реферати по біології » Функціональна активність лейкоцитів крові щурів, які зазнали впливу на них холоду

Функціональна активність лейкоцитів крові щурів, які зазнали впливу на них холоду

Функціональна активність лейкоцитів крові щурів, які зазнали впливу на них холоду

А. Д. Тяпкіна

При дії на організм екстремальних факторів, до числа яких належить переохолодження, відбуваються зміни гомеостатичних констант (насамперед відносяться до системи крові). Білі клітини крові, маючи високу реактивність, швидко включаються в адаптаційні реакції [3]. Вони здатні до неспецифическому реагуванню у відповідь на альтерірующіе впливу. Переохолодження організму може бути викликано зовнішніми низькими температурами і фармакологічними агентами, здатними знижувати температуру тіла. Це, головним чином, речовини, які надають наркотичний ефект. До їх числа відноситься етиловий алкоголь, здатний відтворювати всі характерні риси впливу неінгаляційного наркотиків на теплорегуляцию [5].

Зміна функціональної активності лейкоцитів при охолодженні організму, будучи складною медико-біологічної та клінічної проблемою, вивчено недостатньо. Метою нашого дослідження була оцінка деяких функціональних властивостей білих клітин крові при екзогенному охолодженні організму і гіпотермії, викликаної низькою температурою навколишнього середовища в поєднанні з дією етилового спирту.

Матеріал і методи дослідження

Дослідипроведені на 30 білих щурах - самцях, поділених на 3 групи: контрольна (I), гіпотермія (II), гіпотермія + алкоголь ( III). Тварин II групи охолоджували у воді при температурі 15 ° С до появи ознак "холодового наркозу". Тваринам III групи за 20 хв. до охолодження вводили через шлунковий зонд 30% розчин етилового спирту (1 мл / 100г).

Змішану кров для досліджень брали шляхом декапітаціі у попередньо наркотізірованних тварин. Гепаринизированную кров (10ед / мл) центрифугировали 10хв. при 1500 об / хв. Збирали лейкоцити, а домішка еритроцитів руйнували 0,83% розчином хлориду амонію. Клітини двічі відмивали ізотонічним буферним розчином. Відмиті клітини ресуспендували і визначали їх концентрацію шляхом підрахунку в камері Горяєва.

Фагоцитоз

Для дослідження поглинаючої спроможності нейтрофілів використовували частки латексу розміром 0,8мкм. Суміш лейкоцитів з латексом витримували у вологій камері при 37 ° С протягом 30 хв. при поступовому, легкому збовтуванні. Потім готували мазки, фіксували 5 хв. в метанолі і фарбували АЗУР-II-еозином. Поглинальну здатність нейтрофілів оцінювали за кількістю фагоцитуючих клітин (фагоцитарна активність) та середньому числу поглинених часток (фагоцитарний індекс) [6].

Міграційна активність

Для постановки міграції під агарози використовували модифікований варіант, описаний в численних роботах [4,8]. Агарозу з додаванням культуральної клітинної середовища 199 нашаровується на предметні стекла. Для оцінки спонтанної міграції в агарових гелі за допомогою пробійника вирізали одну лунку, в яку поміщали суспензію лейкоцитів. На другому склі ставили реакцію індукованої міграції. Для цього вирізали групу з двох лунок: одну - для клітинної суспензії, другу - для хемоаттрактанта, в якості якого використовували свіжу плазму крові. Скла поміщали у вологу камеру при 37 ° С на 2 год., Потім занурювали в 2% розчин глутарового альдегіду на 60 хв. після фіксації і видалення агарози, клітини фарбували АЗУР-еозином за Романовським. В обох випадках для оцінки локомоціонной активності вимірювали площу розповсюдження клітин і розраховували хемотаксичний диференціал - відношення змін площі індукованої міграції в порівнянні зі спонтанною до площі клітинного ареалу при мимовільної міграції (%).

Адгезионная здатність

40 мкм суспензії лейкоцитів поміщали в капіляр з внутрішнім діаметром 0,56 мм, попередньо оброблений аутоплазмой. Клітини інкубували у вологій камері при 37 ° С протягом 60 хв. Потім капіляр перфузіровалі розчином Дульбекко при напрузі зсуву 0,1 Н / м2 і повторно - 30 Н / м 2. Вважали число клітин у вихідній суспензії, а також першому (неадгезіровавшіе і з малою силою зчеплення) і другому (з середньою силою зчеплення) змиві. З отриманих даних розраховували число клітин, що залишилися в капілярі (з великою силою зчеплення) [9].

Механічні властивості лейкоцитів

В основу експерименту було покладено методику Tran-Son-Tay R. з співавт. [11]. Витягували капіляри діаметром 4 мкм, поміщали їх в мікрокамеру і з'єднували з манометром. Вся система заповнювалася ізоосмотіческім буфером. Переміщення клітин в капілярі і до капіляри забезпечувалося постійним у всіх дослідах негативним тиском (60 мм вод. Ст.). Всі маніпуляції проводили на предметному столику мікроскопа. Для спостережень і вимірів використовували об'єктив 40 ВИ і окуляр-мікрометр МОВ-1-15 *. Реєстрували для кожної клітини первинні параметри (діаметр лейкоцита в початковому стані, довжину і ширину деформованої клітини, час відновлення до сферичної форми).

Осмотична резистентність

Визначення осмотичної стійкості лейкоцитів проводили класичним способом за методом Сторт [10], підраховуючи відсоток клітин, що збереглися після годинної експозиції в 0,2% розчині хлориду натрію .

Результати досліджень та їх обговорення

Як фактор охолодження була обрана вода температури 15 ° С, т.к. переохолодження у водному середовищі в порівнянні з повітряною (тієї ж температури) настає в кілька разів швидше [2].

Критерієм опірності білих щурів до максимального охолодженню служило час до появи ознак "холодового наркозу" після занурення тварин у воду. Наступ "холодового наркозу" визначалося уповільненням, а потім і порушенням координації плавальних рухів, появою тонічнихсудом і зануренням на дно акваріума. По ходу дослідження було зазначено наступне.

Для щурів II групи була характерна рухова активність у вигляді плавальних рухів. Час до появи ознак "холодового наркозу" становило в середньому 17 хв. Велика частина тварин III групи була малорухливі, але ознаки "холодового наркозу" реєструвалися в середньому через 23 хв. Зміни ректальної температури у тварин II групи склали в середньому 14 ° С, у тварин III групи - 11 ° С. За даними літератури [2], таке зниження температури характеризує середню ступінь гіпотермії.

На основі отриманих в експерименті даних був зроблений аналіз змін активних і пасивних властивостей лейкоцитів в умовах переохолодження організму, в тому числі після введення етилового спирту. Аналіз змін поглинаючої спроможності нейтрофілів в умовах гіпотермії виявив незначне зниження фагоцитарної активності (1%) з одночасним збільшенням числа поглинених часток (19%). Охолодження в умовах алкогольної інтоксикації негативно позначалося на функціональної активності нейтрофілів: знижувалися обидва показники (ФА-10%, ФІ-17%) (табл. 1).

Таблиця 1

Показники поглинаючої спроможності нейтрофілів

Група тварин

Фагоцитарна активність (%)

Фагоцитарний індекс (отн. од.)

I група

92,8 ± 1,01

9,3 ± 0,3

II група

91,5 ± 1,03

11,1 ± 0 , 46 *

III група

84,1 ± 1,28 *, **

8,0 ± 0,49 *, **

Примітка: * - достовірність відмінностей порівняно з контролем (р <0,05);

** - Достовірність відмінностей порівняно з переохолодженням (р <0,05).

Виявлені зміни поглинальної здатності відносяться до неспецифічних реакцій захисту фагоцитуючих клітин, т.к. частинки латексу, використовувані нами в дослідах, не є антигенними і можуть поглинатися нейтрофілами при відсутності опсонінов.

Нейтрофіли виконують фагоцитарну функцію як в крові, так і за межами кровоносної русла. Для здійснення даної функції клітини повинні шляхом черезендотеліальной міграції покинути кровотік. Частина з них повільно рухається вздовж судинної стінки і іноді адгезіруют до неї. Інша частина мігрує через ендотелій. Таким чином, адгезія нейтрофілів є необхідною в процесі черезендотеліального транспорту і фагоцитозу.

Проведене дослідження виявило такі особливості адгезійної здатності лейкоцитів в екстремальних умовах (табл. 2).

Таблиця 2

Адгезионная здатність нейтрофілів

Група тварин

Неадгезіровавшіе клітини (%)

Клітини із середнім ступенем зчеплення (%)

Клітини з великою силою зчеплення (%)

I група

32,2 ± 4,62

11,5 ± 2,12

56,1 ± 6,15

II група

50,3 ± 3,89 *

10,6 ± 0,87

39,1 ± 4, 35 *

III група

29,3 ± 3,9 **

13,1 ± 1,94

57,6 ± 5,7 **

Примітка: * - достовірність відмінностей порівняно з контролем (р <0,05);

** - Достовірність відмінностей порівняно з переохолодженням (р <0,05).

При охолодженні тварин адгезійна здатність лейкоцитів достовірно знижувалася (56%), переважно за рахунок клітин з великою силою зчеплення. Поєднання охолодження з введенням алкоголю призводило до повернення числа адгезіроваться клітин до рівня контрольних тварин. Стабілізуючий ефект в даному випадку пов'язаний, швидше за все, з гуморальними зрушеннями, опосредуемимі етиловим спиртом. Якщо порівняти динаміку показників III групи

Сторінки: 1 2

енциклопедія  з сиру  аджапсандалі  ананаси  узвар