Головна
Реферати » Реферати з біології » Енергетичні речовини тканин нирки

Енергетичні речовини тканин нирки

Так як вільні жирні кислоти пов'язані в плазмі з альбуміном, то вони не фільтруються, а їх надходження в клітини нефрона відбувається з боку міжклітинної рідини. Ці сполуки окислюються більшою мірою в корі нирки, ніж у її мозковій речовині. У нирці утворюються тріацілгліцеріни. Вільні жирні кислоти швидко включаються в фосфоліпіди нирки, які відіграють важливу роль у виконанні різних транспортних процесів. Роль нирки в ліпідному обміні полягає в тому, що в її тканини вільні жирні кислоти включаються до складу триацилглицеринов і фосфоліпідів і у вигляді цих сполук надходять в циркуляцію.

2.Експеріментальная частину.

2.1. Методи і матеріал дослідження.

Дослідження тканин нирки проводилися на статевозрілих 7 місячних білих щурах генетичної лінії Вістар жіночої статі (2шт.) і чоловічого (1 шт.)
(Табл.1).

Табл.1 Матеріал дослідження
| № п / п | Маса тварини, г | Маса нирки, г |
| 1 | 234,0 (9,8 | 1,05 (0,08 |
| 2 | 249,7 (9,8 | 0,76 (0,08 |
| 3 | 214,9 (9,8 | 0,70 (0,08 |
| Середнє значення | 232,9 | 0,84 |

Метод 1. Визначення глюкози.

Глюкоза визначалася редуктометріческім ферріціанідним методом. Принцип методу полягає в наступному: білки тканини осаджуються гідроксидом кадмію.
Глюкоза, яка міститься в безбілковому фільтраті, окислюється в лужному середовищі ферріціанідом калію (червона кров'яна сіль), надлишок якого визначається іодометріческім. Утворився ферроцианид калію зв'язується сірчанокислим цинком, який входить до складу "потрійного розчину" [6].

Метод 2. Визначення глікогену.

Стадія 1. Виділення глікогену. Принцип методу полягає в наступному: тканина піддається десмолізу в 30%-му гідроксиді калію (замінювати на гідроксид натрію не можна, так як при цьому утворюються погано розчинні в спирті натрієві мила і сода - це ускладнює подальшу очищення осаду глікогену). З десмолізата глікоген осідає спиртом.

Стадія 2. Обложений глікоген піддається гідролізу, і утворилася глюкоза визначається редуктометріческім ферріціанідним методом (метод 1)
[6].

Метод 3. Спільне визначення пірувату і лактату.

Стадія 1. Побудова калібрувального графіка для визначення пірувату.
Складається ряд стандартних розчинів пірувату (включаючи контроль - С = 0).
Будується графік залежності оптичної щільності розчинів від концентрації пірувату в розчинах.

Стадія 2. Побудова калібрувального графіка для визначення лактату.
Складається ряд стандартних розчинів лактату (включаючи контроль - С = 0).
Будується графік залежності оптичної щільності розчинів від концентрації лактату в розчинах.

Стадія 3. Визначення кількості пірувату в тканинах нирки колориметричним методом з 2,4-дінітрофенілгідразіном (по Умбрайта).
Принцип методу полягає в тому, що піруват взаємодіє в кислому середовищі з
2,4-дінітрофенілгідразіном. Утворений в результаті реакції 2,4 - дінітрофенілгідразід піровиноградної кислоти на відміну від гідразідов інших кетокислот добре розчинний у толуолі, за допомогою якого його екстрагують з реакційної суміші і створюють лужне середовище, в якій він набуває коричнево-червоне забарвлення. Визначення проводять колориметрически.

Стадія 4. Визначення кількості лактату в тканинах нирки методом з використанням п-оксидифенил (по Баркеру і Саммерсон). Принцип методу.
Молочна кислота кип'ятінням з конц. сірчаною кислотою перетворюється в ацетальдегід, який при конденсації з п-оксідіфенілом утворює 1,1-ді-
(оксидифенил)-етан. Цей продукт конденсації в розчині сірчаної кислоти окислюється в продукт фіолетового кольору. Сірчана кислота діє тут як конденсирующий агент і окислювач. Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості ацетальдегіду, а, отже, і кількості лактату. Метод дозволяє визначати лактат в кількостях від 0,03 до 0,2 мкмоль (2,7 - 18,0 мкг) в пробі.

2.2. Результати та їх обговорення

При проведенні експерименту були отримані наступні результати
(табл.2):

Табл.2 Зміст метаболітів у тканинах нирки в мг%.
| Метаболіт | Зміст метаболіту |
| | експериментальне | літературне |
| глюкоза | 27,9 (1,6 | 54 (6 [7] |
| глікоген | 48,1 (2,2 | 50,4 (3,5 [8] |
| лактат | 35,95 | 32,4 (1,8 [9] |
| піруват | 1,93 (0,19 | 2,64 (0,1 [10] |

Наведемо калібрувальні графіки для визначення вмісту пірувату і лактату:

У джерелі [7] вміст глюкози в тканинах нирки визначалося о-толуїдиновим методом, сутність якого полягає в ферментативному окисленні глюкози до глюконової кислоти з утворенням перекису водню, яка потім визначалася за допомогою про-толуидина. Цей метод більш специфічний для визначення глюкози ніж ферріціанідний, тому що виключає практично всі побічні процеси.

У джерелі [8] для визначення глікогену тканини нирок для дослідження брали прижиттєво під місцевою новокаїнової анестезією. Кількість загального глікогену визначали за методом Пфлюгер. Кількість істинної глюкози визначали за методом Нельсона. Ці методи більш специфічні. Цим можна пояснити розбіжність в результатах по глікогену.

У джерелі [10] в основу визначення пірувату покладено ферментативний метод. Він заснований на непрямому визначенні кількості оксалоацетата, синтезованого в ході ферментативної реакції з пірувату і двоокису вуглецю по окисленню НАДН в присутності надлишку малатдегідрогенази. Спад
НАДН реєстрували спектрофотометрично. Цим можна пояснити розбіжність в результатах по пирувату, так як метод більш специфічний. Вид калібрувального графіка дозволяє говорити про систематичну помилку, однак, розбіжність у літературних і експериментальних даних невелика.

У джерелі [9] в основу визначення вмісту лактату покладено метод
Хохорста. Принцип методу. У присутність лактатдегідрогенази лактат переходить в піруват, причому зв'язування утворюється в ході реакції пірувату з гідразин-гліціновие буфером, що сприяє повному окисленню лактату.

Утворене кількість НАДН еквімолярної кількістю окисленого лактату. Реєстрацію проводили спектрофотометрично.
Висновки

У ході експериментальної роботи були отримані результати, які були зіставлені з літературними даними. На жаль, не вдалося знайти статті, в якій був би використаний ферріціанідний метод (у всіх роботах використовувалися різноманітні ферментативні методи), а також не у всіх роботах використовувалися щури - лінії Вістар (в джерелі [7] досліди проводилися на безпородних щурах обох статей) . Тому, літературні дані можуть бути не досить точними стосовно даної лінії.
Однак, результати, отримані в дослідах, в основному співпали з літературними даними, крім глюкози. Мабуть в досвіді з визначенням глюкози в нирці була допущена груба помилка. Але результати можна вважати, на мій погляд, прийнятними.

Список використаної літератури:

1. Березів Т.Т., Коровкін Б.Ф., Біологічна хімія - М., Медицина,

1998

2. Фізіологія людини / За ред. Смирнова В.М. / - М., Медицина, 2001 р.

3. Загальний курс фізіології людини і тварин / За ред. Ноздрачова А.Д. /

- М., Вища школа, 1991 р.

4. Страйер Л., Біохімія, - М., Мир, 1984 г .

5. Біохімія людини, Маррі Р., Греннера Д., Мейес П., Родуелл В., - М.,

Світ, 1993 р.

6. Пандакова В.Н., Цупило І.А., Лабораторний практикум з обміну речовин, - Донецьк, ДонДУ, 1990 г.

7. Український біохімічний журнал , 1986 р., т. 58, № 6, "Гліколіз в нирках щурів в ранній період після ішемії і при введенні інгібіторів кальмодулліна - АМФ і НАД", І.З.Тамаріна, Г.В. Лисцова, В.І.

Чумаков.

8. Бюлетень експериментальної біології і медицини, 1979 р., т. 87,

№ 6; "Вимірювання активності ключових ферментів глюконеогенезу в печінці та нирках щурів при дії субекстремальних і екстремальних факторів", Панін Е.

9. Пируват і лактат в тваринному організмі / під ред. Островського /-

Мінськ, 1984 р.

10. Біохімія, т. 35, вип. 1, 1970 р., "Глюконеогенез і гліколіз в нирках щурів нормальних і з аллоксановим діабетом", В.С. Ільїн, М.Д.

Балябина.

11. Велика Радянська Енциклопедія, том 1, 3, 4, 15, 20, 21, М.,
1975

12. Фізіологія нирки, під ред. Ю.В. Наточин, Л., 1972

13. Основи нефрології, під ред. Е.М. Тареева, М., 1972


Сторінки: 1 2 3