Реферати » Реферати з біології » Білок - основа життя

Білок - основа життя

Додаток № ...

Опис деяких лабораторно-практичних робіт, використовуваних при апробації спецкурсу "Білок - основа життя".

I. Виділення білків з тканин і біологічних рідин.

Мета: виявити вміст білків в тканинах і біологічних рідинах.

1. Виділення казеїну з молока.

Варіант I.

В хімічний стакан місткістю 50 мл відмірюють циліндром 3 мл молока і додають 7 мл дистильованої води. Суміш перемішують і додають 10-15 крапель 1%-ного розчину соляної кислоти. Кислоту доливають акуратно, по краплях, так як в надлишку кислоти осад розчиняється.
Суспензію перемішують, через 3-5 хвилин утворюється пухкий осад.

Для видалення соляної кислоти в склянку додають 10 мл дистильованої води, перемішують і залишають ще на 5 хвилин. Рідина обережно зливають з осаду. До осаду ще раз додають 10 мл дистильованої води, обережно перемішують вміст склянки і через 5 хвилин фільтрують суміш через паперовий фільтр.

Доказом того, що до складу казеїну входить фосфор: осад з фільтром переносять у широку пробірку зі зворотним холодильником і додають
6 мл 10%-ного розчину гідроксиду натрію. Пробірку нагрівають на піщаній бані протягом 1 години. Рідини дають охолонути і нейтралізують її концентрованої азотної кислотою до слабокислою реакції на лакмус. При нейтралізації випадає осад високомолекулярних продуктів неповного гідролізу білка.

Після відстоювання рідину фільтрують і з фільтратом проробляють біуретову реакцію і молибденовую пробу на фосфорну кислоту. До 5 крапель гідролізату додають 10%-ий розчин NaOH і 2 краплі 1%-ого розчину CuSO4.
Спостерігається фіолетове забарвлення. До 10 крапель молібденового реактиву додають 5 крапель гідролізату і кип'ятять кілька хвилин. У присутності
H3PO4 рідина забарвлюється в лимонно-жовтий колір. При охолодженні випадає жовтий кристалічний осад комплексної сполуки (NH4) 3PO4 (12MoO3.

Варіант II.

До 50-ти мл свіжого молока додають рівний об'єм насиченого розчину сульфату амонію . При цьому випадають в осад альбуміни і казеїн.
відфільтровують через складчастий паперовий фільтр розчин альбумінів.

2. Отримання розчину яєчного альбуміну. ??

Обережно проробляють отвір в шкаралупі яйця з двох кінців і виливають білок у склянку місткістю 500 мл. Того ж склянку додають 250 мл дистильованої води і вміст склянки ретельно перемішують скляною паличкою з гумовим наконечником.

Потім розчин переносять в мірний циліндр, і об'єм розчину доводять до
300 мл додаванням дистильованої води. Розчин залишають на 30 хвилин при кімнатній температурі для освіти пластівчастого осаду глобулінів, потім розливають в пробірки по 20 мл.

20 мл отриманої суспензії двічі фільтрують через складчастий фільтр.
Фільтрат, що містить яєчний альбумін, використовують для подальшої роботи.

3. Виділення білків м'яса.

Поміщають в склянку 40-50 г пропущеного через м'ясорубку знежиреного м'яса, додають 80-100 мл 10%-го розчину NaCl і залишають суміш стояти 15 -
20 хвилин при частому помішуванні. Відфільтровують через паперовий складчастий фільтр або через подвійний шар марлі забарвлену в червоний колір рідина. У розчині містяться головним чином, м'язовий альбумін і глобулін.

4. Виділення рослинних альбумінів.

25 грам пшеничного борошна змішують з 100 мл дистильованої води, і суміш струшують протягом однієї години за допомогою струшувачі. Взвесь борошна центрифугируют і супернатант фільтрують через складчастий фільтр.
Відфільтрований прозорий розчин містить переважно альбумін пшеничних зерен.

II. Реакції осадження білків.

Мета: виявити вплив різних органічних і неорганічних речовин на осадження білків. Вивчити фізичні властивості білків.

1. Осадження білків концентрованими мінеральними кислотами.

У три сухі пробірки наливають по 1-2 мл концентрованої HNO3, H2SO4,
HCl. Потім, нахиливши кожну пробірку, обережно по стінці додають з піпетки по 0,5 мл досліджуваного розчину білка, так щоб він не змішувався з кислотою. Разом дотику двох рідин з'являється білий аморфний осад білка. При струшуванні осад, що випав при дії HNO3, збільшується, а опади випали при дії HCl і H2SO4, розчиняються в їх надлишку.

Концентровані мінеральні кислоти викликають необоротні осадження білків. Це пов'язано як з дегідратацією білкових молекул, так і з денатурацією білка.

2. Осадження білків органічними кислотами.

У дві пробірки додають по 2-3 мл розчину білка і додають в одну з них кілька крапель 5%-го розчину трихлороцтової кислоти (ТХУ), а в іншу - кілька крапель 20%-го розчину сульфосалициловой кислоти. В обох випадках спостерігається випадання осаду білка. Сульфосаліцилова і ТХУ кислоти є чутливими і специфічними реактивами на білок.

ТХУ кислота бере в облогу лише білки і не осаджує продукти розпаду білка і амінокислоти, тому нею користуються часто для повного видалення білків з біологічних рідин (наприклад, сироватки крові).

3. Осадження білків солями важких металів.

У дві пробірки додають по 1-1,5 мл досліджуваного пастора білка, по краплях при струшуванні, додають в одну з них розчин CuSO4, а іншу -
Pb (CH3COO) 2. Випадає пластівчастий осад внаслідок утворення малорастворимого солеобразний з'єднання (з сіллю міді - блакитного кольору).
При надлишку реактиву осад знову розчиняється.

Солі важких металів (Hg, Ag, Cu, Pb та ін) викликають необоротне осадження білків, утворюючи з ними нерозчинні у воді сполуки. Тому що білки застосовують як протиотруту при отруєнні, наприклад, ртутними солями (сулема).

III. Гідроліз білка.

Мета: дати учням уявлення про кислотному, лужному і ферментативному гідролізі білка. Дослідним шляхом встановити продукти розпаду білкової молекули.

1. Кислотний гідроліз простого білка.

При гідролізі білки розпадаються спочатку на високомолекулярні продукти
- пептони, потім на поліпептиди і, нарешті, на амінокислоти.

Для гідролізу відмірюють в круглодонную колбу 20 мл розчину яєчного білка і 5 мл концентрованої HCl. Колбу закривають пробкою з довгою скляною трубкою. Кип'ятять вміст колби під тягою протягом 45 або 90 хвилин.

Відкриття проміжних продуктів розпаду білка в гідролізаті за допомогою биуретовой реакції. Проміжні продукти розпаду білка - пептони - при проведенні биуретовой реакції дають рожеве або червоне забарвлення, а білки - синьо-фіолетове.

2. Ферментативний гідроліз білка.

Підготовчий етап: білок Курінова яйця розвести 1:1 водою і розчин білка влити в киплячу воду (V = 100 мл) при помішуванні.

У дві пробірки налити по 2 мл приготовленого розчину білка. У першу додати 1 мл дистильованої води, в другу - 1 мл 1%-го розчину пепсину. Обидві пробірки поставити у водяну баню при t = 37-40 0C на 15 хвилин.
Виконати біуретову реакцію з вмістом обох пробірок.

У воді забарвлення більш інтенсивна (фіолетова з синім відтінком), так як при гідролізі залишилося більше пептидних зв'язків, ніж у випадку з пепсином
(забарвлення менш інтенсивна - фіолетова з рожевим відтінком) - менше пептидних зв'язків.

У присутності пепсину гідроліз йде інтенсивніше, ніж у присутності води.

IV. Денатурація білків.

Мета: визначити фактори, що викликають денатурацію білка.

4.1. У три пробірки наливають по два мл розчину білка курячого яйця, попередньо розведеного 1:20 і профільтрованого через подвійний шар марлі.

У першу пробірку наливають насичений розчин сульфату амонію; в другу - концентровану HNO3; в третій - етиловий спирт. Білок згортається у всіх пробірках.

4.2. У три пробірки додають по 2 мл розчину білка. По-друге додають одну краплю 1%-го розчину оцтової кислоти; в третьому - одну краплю
10%-го розчину NaOH. Всі три пробірки нагрівають над полум'ям спиртівки.

У першій пробірці (pH = 7) утворюється осад білка, внаслідок його денатурації при нагріванні, у другій пробірці осад утворюється швидше і повніше внаслідок нейтралізації білка в слабокислою середовищі; у третій пробірці (pH> 7) осаду не утворюється навіть при кип'ятінні.

V. Якісні реакції на білки.

(Кольорові реакції на білки; визначення амінокислотного складу білків).

Мета: Шляхом якісних реакцій визначити наявність пептидних зв'язків і
NH2 - груп у молекулах білків; виявити амінокислотний склад білків.

1. Виявлення в молекулах білків пептидних зв'язків (биуретовая реакція).

До 1-2 мл розведеного білка додають подвійний об'єм 30%-ного розчину
NaOH добре перемішують і доливають 2-3 краплі 1%-ного розчину CuSO4.
Знову ретельно перемішують. Розвивається червоно-фіолетове забарвлення.
(Хімізм реакції см. на стор ...).

2. Нінгідринова реакція.

До 2-3 мл розведеного розчину білка доливають 3-4 краплі 1%-ного розчину нингидрина в 95%-ном розчині ацетону. Розчин перемішують і ставлять у водяну баню при t = 70 0С на кілька хвилин. Розвивається синьо-фіолетове або рожево-фіолетове забарвлення.

Нінгідринова реакція доводить наявність NH2 - груп у білках (хімізм реакцію стр. ...).

3. Ксантопротеиновая реакція (реакція на ароматичні амінокислоти: фенілаланін, тирозин, триктофан).

В одну пробірку додають 5 крапель розчину яєчного білка, у другу - розчину желатину, в третьому - розчину міозину. У всі пробірки доливають по 3-5 крапель концентрованої HNO3 і нагрівають. У першій і третій пробірках утворився білий осад, який при нагріванні забарвлюється в жовтий колір і поступово розчиняється в (відбувається гідроліз білка), повідомляючи жовте забарвлення розчину. Желатину, що не містить ароматичних амінокислот, не дає ксантопротеиновой проби. Освіта жовтих плям на шкірі при попаданні концентрованої HNO3 обумовлено цією реакцією (хімізм реакцію стр. ...).

4.

Сторінки: 1 2 3

енциклопедія  з сиру  аджапсандалі  ананаси  узвар