Реферати » Реферати з біології » Інтерстиціальні клітини Кейждела

Інтерстиціальні клітини Кейждела

Виборче пошкодження інтерстиціальних клітин Кейждела (ВКК) метиленовим синім і світлом веде до втрати повільних хвиль.
Нкубація в 50 ммоль метиленового синього (МС) і подальша інтенсивна ілюмінація призводить до зникнення активності повільних хвиль в ВКК пахвового шару циркулярних м'язів в препаратах товстого кишечника собак. Це часто супроводжується зниженням потенціалу спокою мембран. Реполяризації клітини до вихідних-70мВ не відновлює активність повільних хвиль, що вказує на те, що МС безпосередньо перериває освіту повільних хвиль. Після інкубації МС, 2-х хвилинна ілюмінація змінює конформацію мітохондрій в ВКК від дуже конденсованої до ортодоксальної, без індукування яких інших видимих ??змін в гладком'язових клітинах. Після 4-10 хвилинної ілюмінації, ВКК починають прогредиентное руйнуватися збільшеними і розірваними мітохондріями, втрачають цитоплазматичну контрастність і детальність, з'являються розриви плазматичних мембран. У той же час не виявляються пошкодження в гладком'язових і нервових клітинах. Ультраструктура з'єднувальних щілин зберігається. Інтенсивна ілюмінація без преінкубаціі МС призводить до втрати повільних хвиль, при цьому не порушується ультраструктура в препаратах ВКК. У препаратах гладких м'язів, без пахвового шару ВКК, МС і світло не змінюють електричної активності. Автори вважають, що кореляція між виборчим пошкодженням пахвових ВКК і виборчої втратою активності повільних хвиль вказує на те, що ВКК грають незамінну роль у генерації повільних хвиль.
Концепція регуляторної ролі інтерстиціальних клітин Кейджела у функціонуванні шлунково-кишкового тракту (ШКТ) вперше була висунута Stach в 1972 (30), Duchon et al. У 1974 (6), і Faussone-Pellegrini в 1977 (9). І тільки в 1982 році була висунута гіпотеза - ВКК грають роль в генерації ауторітмічності ШКТ (Thunberg). Очевидність того, що ВКК сприяють генерації активності синусового вузла і подальшої генерації повільних хвиль було встановлено на ряді тканин, включаючи тонкий кишечник і товстий кишечник. Важливо і те, що ВКК виявляються в тих областях (пахвові сплетення товстого кишечника), де утворюються повільні хвилі.
У товстому кишечнику собак, очевидність ролі ВКК в генерації активності синусового вузла випливає з наступного:
1. Коли мережі ВКК видаляються, шар циркулярних м'язів (ЦМ) не може генерувати активність повільних хвиль
2. У дуже тонких препаратах, що складаються з мережі ВКК і пов'язаних з ними гладком'язових клітин, постійно записуються спонтанні повільні хвилі.
Автори показали, що електрична активність записана на поверхні пахвового шару - наслідок електричного взаємодії між тілом ЦМ і пахвовій мережею ВКК разом з гладком'язовими клітинами (ГМК). В результаті зайвих пар ВКК до ГМК за допомогою сполучних щілин, роль кожного типу клітин в генерації повільних хвиль не може бути визначена точно в електрофізіологічних дослідженнях із застосуванням ізольованих м'язових клаптів.
До появи електронної мікроскопії, більшість селективних методів для розпізнання ВКК грунтувалися на здатності останніх акумулювати барвник МС поза фізіологічних умов. Взависимости від умов МС може первинно зв'язуватися ВКК або нервової тканиною. У пршлом ідентифікація ВКК з використанням прижиттєвого фарбування МС застосовувалася тільки на тонкому кишечнику мишей, гвінейських свиней і кроликів. У свіжих публікаціях, автори демонструють здатність акумуляції ВКК товстого кишечника собак. У тому ж дослідженні, автори показали, що в пригніченому світлі МС не викликає змін ультраструктур в забарвлених ВКК і знчительности не змінює повільних хвиль.
Попередньому дослідженні, автори з'ясували, що активність повільних хвиль тонкого кишечника мишей зникає, коли селективно пофарбовані ВКК освітлюються. Більш того, ілюмінація МС-забарвлених ВКК в культуріруемих шматочках тонкого кишечника мишей приводила до втрати спонтанної ритмічної контрактильной активності, це ефект був оборотним на короткий період при ілюмінації низької інтенсивності, але незворотнім в інших випадках.
Завданням авторів було виявити метод специфічного пошкодження ВКК товстого кишечника собак. Фототоксичні властивості МС використовувалися для вивчення ймовірних ефектів на активність повільних хвиль і зміни ультраструктури різних типів клітин пов'язаних з пахвовій мережею ВКК.
МЕТОДИ.
Тканини та препарати.
Собаки обох статей були вбиті передозуванням калієвої солі фенобарбіталу (100 мг / кг). Приблизно 5 см проксимального відділу товстої кишки було взято від кожної собаки, відступивши 5 см дистальніше від ілеоцекального зчленування. Потім товстий кишечник розкривався поздовжнім розрізом. Потім очищений сегмент прикріплювався до дна діссекціонной чаші Сільгарда наповненою постійно оксигенированной (95% кисню і 5% СО2) розчином Кребса.
Щоб вивчити специфічність дії МС і світла, автори досліджували дії МС і світла і на препаратах ВКК-ЦМ (пахвова мережа ВКК і ЦК) і на препаратах ЦМ (ЦМ, відділені від пахвового шару ВКК і гладком'язових клітин.
Приблизно 2 кв. мм. Тканини, з пахвовій поверхнею, зверненої вгору прикріплювався до дна переносного тримач. Потім ткан була розрізана вздовж прикріплених країв, виключаючи один край, де була вирізана смуга довжиною 10 мм , шириною 3 мм уздовж довгої осі ЦМ клітин. Вільний кінець смуги був узятий на хірургічний шовк (0,5 мм в діам). Тримач переміщали в розділену камеру причому прикріплену тканина - в записувальну камеру, вільний кінець в стимулюючу камеру. Вільний кінець також з'єднували з сильним перетворювачем.

Ліки та розчини.
Усі розчини спроваджували в роздільну камеру були нагріті до 37 гр і оксигенированной киснем 95% - СО205%. Склад розчину Кребса був такий: 120,3 NaCl, 5,9 KCl, 2,5 CaCl2, 1,2 MgCl2, 20,2 NaHCO3, 1,2 NaH2PO4 і 11,5 глюкози. МС (сигма) був расстворіться в розчині Кребса.
Внутріклітинні запису.
Внутріклітинні записи були зроблені мікроелектродами мали пікове опір 30-50 ом. Мікроелектроди були заповнені 3 М KCl. Заповнені мікроелектроди підключалися до держателя з'єднаному з електрометром. Дані електрометрії відбивалися на осцілоскопе і записувалися на принтер. Електричні імпульси подавалися на м'язовий клапоть. Сила електричного поля відбивалася на осцілоскопе і записувалася на принтері. М'язові клапті підлягають впливу імпульсами тривало оксигенированной розчином Кребса з частотою 500 мл / годину в розділової камері як мінімум 2 години при температурі 37 град перед початком експерименту.
Під час інкубації МС (50 ммоль) інтенсивність світла була низькою. Потім препарати милися розчином Кребса приблизно 5 хвилин. Препарати ілюмінованих оптичними волоконними лампами (максимальна інтенсивність склала 50 мВ / кв.см. Поверхні тканини віддаленої від джерела світла на 3,5 см). інтенсивність світла вимірювалася цифровим фотометром. Після експерименту клапті негайно поміщали в формалін.
Світлова та електронна мікроскопія.
Після експериментальної процедури Сільгард відокремлювали отдержателя з тканиною, фіксованого формаліном. Шматки зберігалися при температурі 4 град. Кожен клапоть ділили на 4-6 шматочків тканини. Перед подальшою процедурою ступінь зв'язування МС визначалася стереомікроскопів. Потім тканину милася 0,1 м фосфатним буфером, фіксувалася 2% осміческіх кислотою в 0,1 М фосфатному буфері протягом 1 години. Ультратонкі зразки фіксувалися спиртовим ацетатом сечової кислоти і досліджувалися в електронному мікроскопі.

Статистичний аналіз.
Статистична значимість даних внезавісимості від різних умов була встановлена ??Student's тестом.
Результати.
Електрофізіологічні дослідження.
Ефекти світла на МС пофарбовані ВКК-ЦМ препарати. Інкубація ВКК-ЦМ препаратів в 50 ммоль МС + 45 хв деполяризація клітин підвищують тривалість повільних хвиль. Щоб зменшити неспецифічні екстрацеллюларние ефекти МС вчасно ілюмінації, тканина милася розчином Кребса. Під час цього усувалися ефекти МС на активність повільних хвиль. Ця частина експерименту виконувалася в пригніченому світлі.
Після інкубації в ІМС і миття інтенсивна ілюмінація скасовувала активність у ВКК-ЦМ препаратах. Скасування меделнних хвиль супроводжувалася деполяризацией клітин до мембранному потенціалу-47 мВ (коливання від-64 мВ до-42мВ). Спільно цього зникли фазові скорочення і тонус клаптя підвищився. Активність повільних хвиль не дивувалася, коли ВКК-ЦМ препарати ілюмінованих з максимальною інтенсивністю протягом 10 хвилин без попередньої інкубації в МС.
Скасування повільних хвиль не було прямим ефектом деполяризації з того моменту, як реполяризация не відновлюється активність повільних хвиль, навіть коли реполяризация застосовувалася до того, як амплітуда повільних хвиль повністю зменшувалася. Ці спостереження вказують на те, що ефекти МС і світла на механізм генерації активності повільних хвиль не залежать від мембранного

Сторінки: 1 2 3 4

енциклопедія  з сиру  аджапсандалі  ананаси  узвар