Реферати » Реферати з біології » Інтерстиціальні клітини Кейждела

Інтерстиціальні клітини Кейждела

коли ЦМ препарати, у яких були видалені пахвові ВКК-ГМ мережі, були інкубувати в МС з наступною ілюмінацією, спонтанна і індукована електрична активність не зачіпалася. Ці спостереження вказують на те, що ефекти МС і світла на ВКК-ЦМ препарати були специфічні тільки для ВКК, не пов'язаних з ГМК.
Хоча усунення активності повільних хвиль МС і світлом супроводжувалося деполяризацией, остання не була відповідальна за інгібування активності повільних хвиль, з того моменту, як реполяризация клітин до їх раніше потенціалу спокою не відновлювала повільні хвилі. Крім того, було відмічено, що повільні волниустраняются у великому діапозоні величин мембранних потенціалів, включаючи мембранний потенціал спокою, властивий циркулярним м'язам, що вказує на, що зміни активності повільних хвиль не викликані змінами величин мембранних потенціалів. На противагу цьому, строфантин також деполяризує мембрани і при цьому усуває активність повільних хвиль (1). Проте, реполяризация мембран до споконвічного потенціалу спокою повністю відновлює активність повільних хвиль. Це вказує на те, що в присутності строфантину, інгібування актівностімедленних хвиль - безпосередній ефект деполяризації.
Локалізація акумуляції МС всередині ВКК дуже специфічна. Коли преципитация МС була проведена так, що вдалося уникнути переміщення і освіти грубих преципитатов було виявлено, що електронно-щільні депозити присутні тільки в ЕПР (ЕР) і його немає в інших цітоплазматічексіх компонентах (35). Це може вказувати на те, що МС входить в ЕР безпосередньо шляхом проникнення через пгладкіе цистерни. Проте, залишається неясним чому МС накопичується в ЕР ВКК, але при тих же обставинах не входить в ЕР ГМК. У досвідчених умовах цього дослідження, зміни в конформації мітохондрій так само як активності повільних хвиль були виявлені при мінімальній інкубації МС протягом 7 хвилин і мінімальної ілюмінації на протязі 2 хвилин, що наводить на думку про те, що первинною причиною усунення повільних хвиль є пошкодження мітохондрій .
Фотодинамічна цитотоксичну дію МС було відомо багато років (2). Нещодавно вивчалася цитотоксическая ефективність фотоінактіваціі МС-чутливих клітин раку жовчного міхура (10), включаючи і супроводжуючі її ультраструктурні зміни (39). Після короткого періоду ілюмінації (5 хвилин), доповідалося, що ультраструктурні зміни були ідентичні даними авторів (дізінтеграція мітохондрій і ранні ознаки ушкодження плазматичних мембран), а висока тривалість ілюмінації вела до розриву мембран клітинної фрагментації. У дослідження фотодинамічного дії МС на ДНК (23) було показано, що оборотні предповрежденія ДНК, викликані МС в темряві стають незворотними коли до інкубації в МС приєднується ілюмінація. Ось і в цьому дослідженні електрофізіологічні ежффекти і ультраструктурні ефекти МС і світла також були незворотними.
Оль ВКК в генерації повільних хвиль.
Астоящем дослідження підкріплює гіпотезу про те, що ВКК незамінні для генерації активності водія ритму в кишечнику. У подібних дослідженнях, що використовують тонкий кишковий мишей ілюмінація світлом червоного лазера усувала внутрішньоклітинно записану активність повільних хвиль після інкубації в МС (36). Було показано, що активність повільних хвиль уражається в препаратах де ВКК забарвлювалися МС і не уражається, де ВКК не фарбується. В іншому дослідженні (37), спонтанна скорочувальна активність повільних хвиль була збережена, коли в культуріруемих шматочках мускулатури тонкого кишечника мишей пофарбовані МС ВКК були переглянуті під мікроскопом в дуже тьмяному світлі, але ці шматочки швидко ставали нерухомими при сильному освітленні.
Справжнє ісследованіеспеціфіческі встановлює вирішальну роль ВКК в генерації повільних хвиль в товстому кишечнику собак як показувалося перш (12,18,19,21,29). Автори висувають гіпотезу про те, що циклічна внутрішньоклітинна активність періодично активує струми водія ритму. У цьому випадку ВКК можуть бути або біохімічними годинами або одночасно біохімічними годинами і іонними каналами, що відповідають за генерацію струму водія ритму. Хоча спонтанні осціляціі, записані в ізольованих ГМК (25) і клітинах близьких за описом до ВКК (17,26), і усувалися блокаторами кальцієвих каналів L-типу і отже не відображають повільні хвилі, як компонент водія ритму, які в принципі цими блокаторами НЕ усуваються (14). Таким чином, спонтанно відбуваються осціляціі не мають характеристик повільних хвиль.
Ледующий питання стосується ролі ГМК в генерації повільних хвиль, як компонента водія ритму. Гіллясті ГМК, які інтимно соедіняютс з ВКК з'єднувальними щілинами становлять особливий інтерес. Якщо ВКК єдині клітини відповідальні за генерацію токо водія ритму, то величина струму, яку кожна ВКК повинна генерувати, щоб деполярізіровать все сусідами з нею клітини з високим опором поверхні, повинна бути величезною. Можливо й інше: ВКК - це біохімічні годинник і ВКК посилають внутрішньоклітинні метаболіти через сполучні щілини в інтимно з'єднані з ними ГМК. Завдяки такій метаболічної зв'язку (8) асоційовані ГМК можуть перебувати в синхронії з ВКК, коли канали водія ритму і в ВКК і в асоційованих з ними ГМК - активовані. Обгрунтування цієї частини гіпотези вимагає ідентифікації каналів водія ритму і докази існування таких каналів у ВКК і ГМК. Цікавий той факт, що в присутності тетраетіл амонію, BaCl2 і карбохола, ізольований шар ЦМ без пахвовій робочої мережі ВКК-ГМК генерує потенціали дії, які ідентичні за частотою з повільними хвилями, але усуваються блокаторами кальцієвих каналів L-типу (D-600) ( 18). Це і подальше дослідження (20) показали, що ЦМ без пахвовій робочої мережі ВКК-ГМК може генерувати потенціали з характеристиками подібними активності повільних хвиль.
Активність повільних хвиль також зникає після обробки тканин Родалін 123 в полнослойних препаратах м'язів (38). Родалін 123 - специфічний маркер мітохондрій, і таким чином він не специфічний для ВКК, хоча ВКК особливо багаті мітохондріями. Після проникнення в мітохондрії, Родалін 123 стає Цитотоксичність завдяки руйнуванню АТФ (24). Отже, ефект Родоліна 123 наводить на думку про те, що активність повільних хвиль знаходиться в строгій залежності від внутрішньоклітинного метаболізму. Це узгоджується з спостереженнями про те, що активність повільних хвиль чутлива до високих температур (1), блокується інгібіторами метаболізму, такими як динитрофенол і карбоніл ціанід (H. Preiksaitis і JD Huizing, неопубліковані дані) і уражається при зміні конформації мітохондрій (справжнє дослідження) . Це підтримує гіпотезу авторів про те, що компонент повільних хвиль водія ритму утворюється завдяки внутрішньоклітинного метаболізму.
Таблиці, графіки та зображення.
Таблиця 1. Ефекти інкубації в 50 мМ метиленового синього (45 хвилин) на електричну активність препаратів ВКК-ЦМ з або без ілюмінації
араметри
У розчині Кребса
+ Метиленовий синій
+ Світло
Мембранний потенціал спокою, мВ
-72,8 +-0,8
-70,6 +-0,9
-47,3 +-1,9
-69,7 +-1,6

Частота, циклів / хвилину

5,3 +-0,2
5,0 +-0,2

Тривалість, с
Амплітуда дії, мВ
3,8 +-0,3

38,6 +-1,4

4,9 +-0,7

37, 4 +-1,5


Амплітуда плато, мВ
34,1 +-1,3
33,2 + - 1,6



Частота коливань, мВ / c
192,3 +-23,8
169,4 +-18 , 7


Графік 1. Електрофізіологічні ефекти ілюмінації на пофарбовані МС препарати ВКК-ЦМ.
А: МС (45 хвилинна інкубація) трохи знижує мембранний потенціал спокою і збільшує тривалість повільних хвиль. Ці ефекти зникають після промивання препаратів від МС в розчині Кребса протягом 5 хвилин. Препарти потім висвітлювалися з максимальною інтенсивністю. У подальшому, амплітуда повільних хвиль знижувалася при цьому мембранний потенціал спокою зменшувався до-44мВ. Реполяризації мембрани не встановлювати активність повільних хвиль, що вказує на те, що усунення повільних хвиль є наслідком інгібування механізму генерування повільних хвиль і не викликана деполяризацией.
В: Зменшення интесивности світла на 1/3 від того, що було в досвіді А значно подовжує період ілюмінації, необхідний для усунення повільних хвиль. У цьому експерименті спостерігалися повільні хвилі більшої тривалості під час періоду деполяризації. Повільні хвилі усувалися при величині мембранного потенціалу спокою-42 мВ.

Графік 2. Ефекти мембранного потенціалу на активність повільних хвиль.
А: після 45 хвилинної інкубації в МС і промивання в розчині Кребса,

Сторінки: 1 2 3 4

енциклопедія  з сиру  аджапсандалі  ананаси  узвар