Реферати » Реферати з біології » Сорбційні властивості моху по відношенню до мікроорганізмів і важких металах

Сорбційні властивості моху по відношенню до мікроорганізмів і важких металах

| |
| |
| |
| |
| 2. ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ЧАСТИНА |
| |
| 2.1. Методи досліджень |
| |
| 2.1.1. Отримання мікробної суспензії |
| |
| Поживний агар, який готується згідно прописи, заливають попередньо по |
| 5-10 мл в пробірки, які залишають похилими в спеціальному штативі до |
| повного застигання середовища. Бактеріологічною петлею відбирають клітини |
| мікроорганізмів і вводять петлю в пробірку зі скошеним агаром до дна. Злегка |
| торкаючись бактеріологічної петлею поверхні середовища, проводять від дна пробірки |
| вгору зигзагоподібну лінію, тим самим, засіваючи культуру мікроорганізмів. Після |
| посіву пробірки поміщають в термостат (30 (С) на 1 добу (по закінченню цього терміну |
| пробірки витягують з термостата) і заливають у них по 2.0-3.0 мл |
| фізіологічного розчину (ФР). Обережно відокремлюють мікробну культуру від агару |
| поступовим струшуванням і погойдуванням пробірки. Отриману суспензію зберігають у |
| холодильнику. |
| |
| |
| 2.1.2. Визначення кількості життєздатних клітин методом висіву на щільну |
| середу |
| |
| Мікробну суспензію розводять у стерильному фізіологічному розчині, при цьому |
| використовуючи один і той же коефіцієнт розведення. |
| Посів здійснюють з п'ятого, 6-ого та 7-го розведень переносячи 0, 1 мл |
| суспензії на поверхню поживного агару в чашках Петрі. Потім суспензію |
| рівномірно розподіляють шпателем по поживного агару. Висів з кожного |
| розведення здійснюють стерильною піпеткою. Після посіву чашки поміщають в |
| термостат (30 (С) на добу. |
| Кількість життєздатних клітин в 1 мл суспензії розраховують за такою |
| формулою: |
| |
| M = a * 10z / V; (2.1 |
|) |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| |
| | | | | | | БГТУ 02.00.ПЗ |
| | | | | | | |
| І | Кількість | Лі | № | Підпис | Дат | |
| з |. уч | ст | док. | Ись | а | |
| м |. | | | | | |
|. | | | | | | |
| | Ковальова | | | Експериментальна частина | Стади | Лист | Листів |
| Розробити | ч А. | | | | я | | |
|. | | | | | | | |
| Н.конт | | | | | |
| р. | | | | | |
| Утв. | | | | | |

Де M - кількість клітин в 1 мл вихідної суспензії; а - кількість колоній, які виросли на чашках
Петрі;

Z - порядковий номер розведення суспензії;

V - об'єм суспензії, взятої для висіву на чашку Петрі, мл.

Величину оптичної щільності вимірюють за допомогою фотоколориметр
ФЕК-56М. Для вимірювання світлорозсіювання вибирають світлофільтр, який забезпечує максимум пропускання світла даної суспензією. У результаті дослідів отримали, що максимум пропускання світла забезпечує довжина хвилі 540 нм.

2.1.3. Вивчення сорбції металів мохом

Для експерименту на аналітичних вагах зважують зразки моху масою 200 +0,5 мг і поміщають їх в скляні флакони з пригвинчуються кришками об'ємом 100мл. Потім в ці ж флакони заливають по 50 мл розчину металу різної концентрації (для експерименту було обрано такі концентрації металів: 0,1;
0,02; 0,005; 0,0001; 0,00002; 0 , 00001 моль / л), які готують шляхом послідовного розведення вихідного розчину солі металу (0,1 моль / л). Флакони закривають і залишають на 24 години при кімнатній температурі (18 +2 (С) при періодичному перемішуванні. Після чого мох із суспензії фільтрують через паперовий фільтр в колби для титрування і титрують за наступними методиками.

2.1 .3.1. Визначення міді комплексонометріческім методом

Як джерело міді використовували сульфат міді.

Іони міді утворюють з ЕДТА комплекси блакитного кольору з константою стійкості 6,3 * 1018 ( іонна сила 0,1: 20 (С). Аналізований розчин розбавляють водою до мітки в мірній колбі. Рівноважні розчини з вихідною концентрацією 0,100 моль / л після фільтрування у кількості 48 мл розбавляють водою в мірній колбі до 100 мл. Після перемішування відбирають піпеткою аликвотную частина розчину в конічну колбу, додають 20 мл дистильованої води, 5 мл буферного розчину, на кінчику металевого шпателя 20-30 мг індикаторної суміші, розчиняють її і титрують розчином ЕДТА 0,0500 М до зміни забарвлення з зеленувато-жовтого кольору в чисто-фіолетове . Вимірюють обсяг ЕДТА і вводять 1 краплю 2 М розчину NH4ОН, якщо колір розчину залишається фіолетовим, титрування припиняють; якщо від додавання аміаку забарвлення змінилася в жовту або жовто-зелену, продовжують титрування розчином
ЕДТА до стійкої фіолетового забарвлення.

В якості буферного розчину використовують ацетатний буфер (ацетат амонію, 50% розчин) з pH6. Титрування ведуть на холоду (при кімнатній температурі 18 +2 (С).

В якості металлоіндікатора використовують мурексид (суміш з хлоридом натрію у співвідношенні 1:100).

Масу визначається речовини розраховують за формулою (2.2.):

m = (V1 * Vж * c1 * M) / (V2 * 1000) (2.2)

де - V1 - об'єм розчину ЕДТА, пішов на титрування;

V2 - обсяг аналізованого рівноважного розчину
(аліквотна частина); c1 - молярна концентрація ЕДТА;

M - молярна маса визначається речовини;

Vж - об'єм мірної колби, з якої відбирали аликвотную частину.

2.1.3.2. Визначення кадмію комплексонометріческім методом

Як джерело кадмію в роботі використовували ацетат кадмію.

Відбирають аликвотную частина аналізованого розчину з мірної колби місткістю 100 мл, додають 2-3 мл буферного розчину з pH 10
(аміачний буферний розчин: 67г NH4Cl і 570 мл 25%-ного NH3 в 1 л розчину), 15 мл води, перемішують і додають на кінчику шпателя 20 -
30 мг суміші індикатора еріохромового чорного Т і хлориду натрію.
Перемішують до повного розчинення індикаторної суміші і титрують розчином ЕДТА 0,0500 М до зміни забарвлення розчину з винно-червоного у блакитну.

Масу визначається речовини розраховують за вищевказаною формулою
(2.2).

2.1.4. Визначення кінетики сорбції металів мохом

У скляні флакони поміщають навішування по 200 +0,5 мг моху, зважені на аналітичних вагах. Додають по 50 мл розчину металу 0,02 моль / л і ретельно перемішують. Через 5, 10, 20, 30, 60 і 120 хв мох відфільтровують з аналізованих розчинів. Фільтрати міді та кадмію відтитровують розчином ЕДТА за вищеописаною методикою.

2.1.5. Вивчення сорбції металів мікроорганізмами

У мірну колбу на 50 мл спочатку додають 1 мл мікробної суспензії, потім доводять об'єм до мітки досліджуваним розчином металу.

Після цього вливають вміст мірної колби у флакони на 100 мл з пригвинчуватися кришками. Флакони залишають на 24 години, після закінчення яких розчини центрифугируют при 8000 об / хв протягом 10 хвилин. Далі розчин, відокремлений від мікроорганізмів, відтитровують розчином ЕДТА за вищеописаною методикою.

2.1.6. Визначення кінетики сорбції металів мікроорганізмами

У мірну колбу на 50 мл спочатку додають 1 мл мікробної суспензії, потім доводять об'єм до мітки досліджуваним розчином металу.
Після цього вливають вміст мірної колби у флакони на 100 мл з пригвинчуватися кришками.

Через 5, 10, 20, 30, 60 і 120 хв відфільтровують культуру мікроорганізмів на мікробному фільтрі і фільтрати відтитровують розчином ЕДТА.

2.1.7. Вивчення сорбції металів у системі мох-суспензія мікроорганізмів

У скляні флакони поміщають проби моху 200 +0,5 мг попередньо зважені на аналітичних вагах. Потім в ці ж скляні флакони додають 50 мл розчину металу різної концентрації. І потім додають 1 мл мікробної суспензії. Після цього систему при періодичному перемішуванні залишають на 24 години. Через добу досліджувані розчини фільтрують на мікробному фільтрі і титрують розчином ЕДТА за методиками зазначених у пп. 2.1.3.1. і 2.1.3.2 ..

2.1.8. Визначення кінетики сорбції металів мікроорганізмами, адсорбованими на моху

У скляні флакони з пригвинчуються кришками поміщають навішування моху масою 200 +0,5 мг, 1 мл мікробної суспензії і 50 мл розчину металу 0,02 моль / л . Через 5, 10, 20, 30, 60, 120 хв культуру мікроорганізмів фільтрують через мікробний фільтр і фільтрати відтитровують розчином ЕДТА.

2.1.9. Отримання кривої виживаності мікроорганізмів

Виживання мікроорганізмів вивчають посівом їх на чашки Петрі з поживним агаром. Мікробну суспензію використовують після обробки її металами в досвіді з вивчення сорбції металів мікроорганізмами.

2.1.10. Вивчення адсорбції мікроорганізмів мохом

У мірну колбу на 50 мл спочатку додають 1 мл мікробної суспензії і доводять об'єм до мітки дистильованою водою. Потім переливають розчин мікробної суспензії в качальную колбу і додають навішування моху масою 200 +0,5 мг. Всі колби ставлять на гойдалку на 2 години. Вимірюють оптичну щільність і роблять висів на життєздатність. Результати представлені в

Сторінки: 1 2 3

енциклопедія  з сиру  аджапсандалі  ананаси  узвар