Реферати » Реферати з біології » Вміст аскорбінової, дегідроаскорбінової і дикетогулоновая кислот в еритроцитах здорових дітей і страждають на інсулінозалежний цукровий діабет

Вміст аскорбінової, дегідроаскорбінової і дикетогулоновая кислот в еритроцитах здорових дітей і страждають на інсулінозалежний цукровий діабет

досягаючи 20-30 ммоль / л і більше.

Діабет у дітей та підлітків характеризується важким перебігом і, як правило, гострим початком захворювання. Від часу появи перших ознак захворювання (спрага, схуднення, виділення великої кількості сечі, загальна слабкість, сухість шкіри) до розвитку важкого стану і значних порушень обміну речовин, проходить зазвичай 2 тижні. Діти, хворі на цукровий діабет, вимагають обов'язкового лікування і постійного лікувального контролю.

ГЛАВА 2. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ

Нами обстежений 41 дитина, яка страждає на інсулінозалежний цукровий діабет, і 10 чоловік контрольної групи. Об'єктом дослідження служили еритроцити хворих і здорових дітей. Для отримання еритроцитів кров брали з ліктьової вени краплинним способом, як антикоагулянту використовували гепарин.

Дослідження проводили в загальній еритроцитарної масі дітей, які страждають на інсулінозалежний цукровий діабет, і дітей контрольної групи.

2.1. Підготовка еритроцитів

Свіжу гепаринизированную кров розливали в центрифужні пробірки по 5 мл. Після пятнадцатиминутного центрифугування при 3000 об / хв при 40 С відбиралися й відкидалися лейкоцитарний шар і плазма. Еритроцити суспендованих в десятикратному обсязі 0.9% розчину NaCl і центрифугували протягом п'ятнадцяти хвилин при 3000 об / хв. Супернатант відсмоктували, процедуру повторювали 3 рази. Це робилося для більш щільної упаковки еритроцитів.

2.2. Метод роздільного визначення аскорбінової, дегідроаскорбінової і дикетогулоновая кислот в еритроцитах

Для кількісних визначень АК, ДАК і ДКГК використовували метод JH
Roe, C.A. Kuether (1943) в модифікації В.В. Соколовського, Л.В. Лебедєвої,
Т.Б. Ліелуп (1967). Метод заснований на взаємодії 2,4 - дінітрофенілгідразіна з ДАК з утворенням в сірчаної кислоти відповідного Озазон. ДАК і ДКГК дають червоне забарвлення, що використовується для фотометричного визначення. Для обчислення суми всіх кислот їх окислюють 2,6 - діхлорфеноліндофенолятом натрію. Зміст АК визначають по різниці. Для диференційованого визначення ДАК і ДКГК суміш піддають дії відновників, при цьому в АК відновлюється тільки ДАК. Як відновлювача використовували димеркаптопропансульфонат натрію
(унітіол)

Реактиви:

1. 2.10 М унітіол (0.84 мл 5% розчину ампулированного препарат в 100 мл

0.2 М фосфатного буфера рН 7.0. зберігати не більше доби).

2. 5% трихлороцтової кислота (ТХУ). Зберігати в холодильнику не більше двох тижнів.

3. 85% розчин сірчаної кислоти (100 мл води + 900 мл концентрованої сірчаної кислоти).

4. 2% розчин 2,4-дінітрофенілгідразіна в 9Н сірчаної кислоті, що містить

0.25% тіосечовини (зберігати в холодильнику не більше 1 місяця).

5. 0.001 Н розчин 2,6 - діхлорфеноліндофенолята натрію (фарба

Тильманса). Зберігати в темряві не більше 1 тижня.

6. 0.9% розчин хлориду натрію (фізіологічний розчин).

Хід визначення.

У три пробірки поміщали по 0.5 мл упакованих та відмитих від плазми еритроцитів з відомим гематокритом. У першу додавали 0.25 мл фізіологічного розчину і 0.25 мл унітіолу. Після п'ятнадцятихвилинної інкубації при періодичному помішуванні суспензії відбирали 0.5 мл екстракту, до якого додавали 1.5 мл ТХУ.

У дві інші пробірки також додавали по 1.5 мл ТХУ.

У дві пробірки вносили по 0.75 мл супернатанта, отриманого при центрифугировании суміші упакованих еритроцитів з ТХУ. В одну з пробірок додавали по краплях 0.001 Н розчин 2,6-діхлорфеноліндофенолята натрію до появи слаборозовим фарбування, стійкого протягом 30 секунд. У третю пробірку поміщали 0.75 мл супернатанта, отриманого після центрифугування суміші упакованих еритроцитів з фізіологічним розчином, унитиолом і ТХУ. У всі пробірки додавали по 0.25 мл 2,4 - дінітрофенілгідразіна і доводили обсяг до 1.25 мл дистильованою водою, інкубували при 100 0 С протягом 10 хвилин і охолоджували в крижаній бані. У кожну пробірку додавали невеликими порціями 1.25 мл 85% розчину сірчаної кислоти, охолоджуючи у крижаній лазні після кожної порції. Забарвлені розчини фотометрувати через годину при довжині хвилі 540 нм.

Концентрацію кислот визначали за формулою:

С = (3 * А) / 0.085; де

С - концентрація кислот, мг%

3 - концентрація стандартного розчину, мг%

А - оптична щільність проби

0.085 - оптична щільність стандартного розчину

2.3. СТАТИСТИЧНА ОБРОБКА РЕЗУЛЬТАТІВ

Результати досліджень оброблялися статистично (Лакин І.А., 1976).

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТИ І ЇХ ОБГОВОРЕННЯ

Метою дослідження було визначення змісту аскорбата і його окислених форм - ДАК і ДКГК в загальній еритроцитарної масі дорослих, страждаючих ІЗСД, зі стажем хвороби більше 10 років; порівняння і зіставлення отриманих результатів з даними, отриманими раніше, в ході роботи зі здоровими дітьми і страждаючими ІЗСД. В експерименті брало участь 21 дорослий у віці від 25 до 40 років, 37 хворих дітей і група контролю, що включає
10 здорових дітей. Результати досліджень відображені на діаграмах.

Рис.1. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах здорових дітей і дітей, що страждають ІЗЦД (мг%)

Рис. 2. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах дорослих, страждаючих ІЗСД (мг%)

Як випливає з отриманих результатів, в еритроцитах дітей і дорослих, страждаючих ІЗСД, спостерігається збільшення вмісту окисленої форма АК-ДАК, що може свідчити про порушення процесу відновлення АК в ДАК, більший участь АК в метаболічних процесах, порушенні транспорту АК в клітці.

Процентний вміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК також демонструє превалювання окислених форм АК над відновленої.

Рис. 3. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах здорових дітей і страждають ІЗСД (%).

Рис. 4. Зміст загальної АК, АК, ДАК і ДКГК в еритроцитах дорослих, страждаючих ІЗЦД (%).

Всі отримані дані узгоджуються з даними літератури про зміну загальної кількості АК в організмі при патології (нормальний вміст становить 5 - 15 мг%) і співвідношення «окислена форма АК / відновлена ??форма АК» у бік збільшення перших .

ВИСНОВКИ

1. Зміст загальної АК в еритроцитах дітей і дорослих, страждаючих ІЗЦД, становить 19.52 мг% і 6,47 мг%, в еритроцитах здорових дітей-

12.48 мг%.

2. Зміст відновленої АК в еритроцитах хворих дітей і дорослих становить 4.1 і 2,01 мг% (20.5 і 31% від загальної АК), в еритроцитах здорових дітей - 4.28 мг% (33%) .

3. Зміст окислених форм АК - ДАК і ДКГК в еритроцитах хворих дітей і дорослих становить 15.5 і 4.46 мг% (79.5 і 69% від загальної

АК), в еритроцитах здорових дітей - 8.36 мг% (67%).

4. У загальній еритроцитарної масі хворих дітей співвідношення окислена форма АК / відновлена ??форма АК становить 4/1, що свідчить про превалювання окисленої форми АК над відновленої.

5. У загальній еритроцитарної масі здорових дітей це співвідношення дорівнює

2/1, тобто, очевидна тенденція до зростання вмісту відновленої АК.

Висновок

Вже давно довели той факт, що аскорбінова кислота є постійною складовою частиною тканин і органів людини. Важливість виконуваних нею фізіологічних функцій не підлягає сумніву. Деякі з них давно відомі і добре вивчені. Наприклад, те, що вітамін С надає сприятливу дію на роботу імунної системи, нормалізує еритропоез і продукцію колагену, є компонентом антиоксидантної системи клітини. Проте численні дослідження недавнього часу показали, що можливості цієї речовини набагато ширше, ніж уявлялося досі. Наприклад, було виявлено цінна властивість аскорбата нормалізувати рівень цукру в крові, роблячи позитивний вплив на вуглеводний обмін. При виконанні цієї та інших біохімічних функцій аскорбінова кислота оборотно окислюється в ДАК, при подальшому впливі окислювача необоротно переходить в ДКГК. За даними літератури, співвідношення
«окислена форма АК / відновлена ??форма АК» може змінюватися при різних патологіях, як і її загальний зміст в організмі. Однією з поширених патологій є інсулінзалежний цукровий діабет.
Оскільки ІЗЦД є ендокринною патологією, що протікає з порушенням вуглеводного обміну, у регуляції якого аскорбат грає важливу роль, було б логічним припустити, що його вміст в організмі хворого виявиться іншим, ніж у здорової людини. Експериментальні дані підтвердили це припущення. В організмі хворої дитини зміст загальної АК підвищено на 37% порівняно із загальною АК і становить 19,52 мг%, тоді як нормальним вважається наявність від 5 до 15 мг% аскорбата. Середнє значення АК у здорової дитини - 12,48 мг%. У той час як зміст ДКГК в процентному співвідношенні практично не змінено і становить у хворих і здорових дітей 46 і 49,4% відповідно (6,16 мг% і 8,96 мг%), концентрація ДАК у хворих дітей підвищена проти здорових майже вдвічі і становить 33,5% замість 17,6% (6,54 мг% і 2,2 мг%). Основні відмінності виявляються в процентному вмісті відновленої форми АК. Її зміст у здорових дітей становить 33% загальної АК (4,28 мг%), тоді як у хворих дітей воно нижче на 13% і становить 4,1 мг%. Таким чином, співвідношення
«окислена форма АК / відновлена ??форма АК» у хворих дітей становить
4:1, на відміну від здорових дітей, у яких воно дорівнює 2 : 1.

На підставі цих даних можна припустити такі причини подібних змін вмісту загальної АК і її метаболічних форм в організмі хворих
ІЗЦД дітей:

1) При

Сторінки: 1 2 3 4 5

енциклопедія  з сиру  аджапсандалі  ананаси  узвар